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隨著科學技術的不斷發展進步,利用羊的繁殖生理原理, 在羊的繁殖過程中采用同期發情、冷凍精液、超數排卵與胚胎 移植及早期妊娠診斷等先進新技術,可以加快羊的繁殖和育種工作,大大提高了養羊業的生產水平和生產能力。
一、同期發情 同期發情技術就是利用某些激素人為地控制和調整母羊自然的發情周期,使一群母羊中的絕大多數按計劃在幾天時間內集中發情。同期發情有利于推廣人工授精。特別是在居住分散的山區,如果能在短時間內使羊群集中發情,集中進行 人工授精就非常便利。同期發情,集中配種,可以縮短配種季節,節省大量的人力物力。同時又因配種同期化,對以后的分娩產羔、羊群周轉以及商品羊的成批生產等一系列的組織管理帶來方便,適應現代集約化生產或工廠化生產的要求。同期發情有兩種方法:一種方法是促進黃體退化,從而降 低孕激素水平;另一種方法是抑制發情,增加孕激素水平。兩種方法所用的激素性質、作用各不相同,但都是改變母羊體內孕激素水平,達到發情同期化的目的。
(一)促進黃體退化法 應用前列腺素PCF(2a)及其類似物使黃體溶解,從而使黃體期中斷,停止分泌孕酮,再配合使用促性腺激素,引起母羊發情。用于同期發情的國產前列腺素F型以及類似物有15甲基PGF(2a)前列烯醇和PCF(la)甲酯等。進口的有高效的氯前列 烯醇和氟前列烯醇等。前列腺素的施用方法是直接注入子宮頸或肌肉注射。注入子宮頸的用量為1~2毫克;肌肉注射一般為0.5毫克。應用國產的氯前列烯醇(又名80996)時,在每只母羊頸部肌肉 注射2毫升含0.2毫克的氯前列烯醇,1~5天內可獲得90% 以上的同期發情率,效果十分顯著。 前列腺素對處于發情周期5天以前的新生黃體溶解作用不大,因此前列腺素處理法對少數母羊無作用,應對這些無反應的羊進行第二次處理。還應注意,由于前列腺素有溶解黃 體的作用,已懷孕母羊會因孕激素減少而發生流產,因此要在確認母羊屬于空懷時才能使用前列腺素處理。
(二)孕激素處理法 向待處理的母羊施用孕激素,用外源孕激素繼續維持黃體分泌孕酮的作用,造成人為的黃體期而達到發情同期化。為了提高同期率,孕激素處理停藥后,常配合使用能促使卵泡發育的孕馬血清(PMSG)。現在已能人工合成多種制劑的孕酮類似物質,主要有甲孕酮(MAP)、甲地孕酮(MA)、氯地孕酮(CAP)、氟孕酮(FGA)、18甲基炔諾酮、16次甲基甲地孕酮(MGA)等。不同種類藥物的用量是:孕酮150~300毫克;甲孕酮40~60毫克;甲地孕酮80~150毫克;氟孕酮30~60毫克;18甲基炔諾酮30~40毫克。這些人工合成的孕激素,其功能與孕酮類似,但其效率往往還大于孕酮,同時有乳劑、丸劑、粉劑等不同劑型。由于劑型不同,孕激素給藥處理的方法有口服、肌肉注射、皮下埋植和陰道栓塞等。 1.口服孕激素 每日將定量的孕激素藥物拌在飼料內,通過母羊采食服用,持續12~14天,因此每日用藥量除甲孕酮外應是前述藥物用量的1/5~17/10,并要求藥物與飼料攪拌均勻,使采食量相對一致。最后一天口服停藥后,隨即注射孕馬血清400~750國際單位。 2.肌肉注射 一般油劑常用于肌肉注射。每日按一定藥物用量注射到處理羊的皮下或肌肉內,持續10~12天后停藥。這種方法劑量易控制,也較準確,但需每日操作處理,比較麻煩。國內生產的肌注“三合激素”只處理1~3天,大大減少了操作日程,較為方便。 3.陰道栓塞法 將乳劑或其他劑型的孕激素按劑量制成懸浮液,然后用泡沫海綿浸取一定藥液,或用表面敷有硅橡膠,其中包含一定量孕激素制劑的硅橡膠環構成的陰道栓,用尼龍細線把陰道栓連起來,塞進陰道深處子宮頸外口,尼龍細線的另一端留在陰戶外,以便停藥時拉出栓塞物。陰道栓一般在14~16天后取出,也可以施以9~12天的短期處理或16~18天的長期處理。但孕激素處理時間過長,對受胎率有一定影響。為了提高發情同期率,在取出栓塞物的當天可以肌肉注射孕馬血清400~750國際單位。 4.皮下埋植法 一般丸劑可直接用于皮下埋植,或將一定量的孕激素制劑裝入管壁有小孔的塑料細管中,用專門的埋植器將藥丸或藥管埋在羊耳背皮下,經過15天左右取出藥物,同時注射孕馬血清500~800國際單位。人工合成的孕激素,即外源孕激素作用期太長,將改變母羊生殖道環境,使受胎率有所降低,因此可以在藥物處理后的第一個情期過程中不配種,待第二個發情期出現時再實施配種,這樣既有相當高的發情同期率,受胎率也不會受影響。
二、冷凍精液及其應用
(一)冷凍精液的原理 常溫或低溫保存的精液,精于仍有代謝作用,所以保存的時間不會太長。現在已能將精液保存溫度降到冰點以下,使精液冷凍起來,完全停止代謝作用,從而使精液保存幾個月甚至長達幾十年。冷凍精液保存時間長,遠距離運輸方便,對普及人工授精,擴大優秀公羊的利用率起著非常重要的作用。冷凍精液的冷凍源有兩種:一種是干冰,即固體二氧化碳,其致冷溫度為-78℃。一般用保溫瓶或冰瓶作容器;另一種是液態氮氣,其致冷溫度達-196℃,因此必須要用液氮罐貯存。由于精液是在冰點以下的溫度中保存,精子的細胞液和細胞質可能會因滲透壓不同而冰點下降度不同。細胞液和細胞質在通過冰點時不能同時凍結造成精子細胞成分分離,從而打擊精子活力,形成不可逆的冷休克。冷凍精液的冷打擊溫度為0~-40℃,。為了減少打擊溫度對精子的傷害,冷凍精液的稀釋液應含有甘油保護成分,其稀釋倍數、稀釋次數及稀釋方法均與常溫或低溫保存相同。 科學家們研究發現,稀釋液中如果含有甘油,就可避免精子發生冷休克,順利地通過滴凍過程中的冷打擊溫度。一般甘油含量為稀釋液容量的7%~10%。冷凍精液稀釋多采用“卵黃~檸檬酸鹽一甘油”,或“卵黃~糖一甘油”稀釋液。為減少甘油對精子的有害作用,先以不含甘油的稀釋液將精液稀釋至最后倍數的一半,經1~2小時緩慢降溫至5℃,再用含甘油的稀釋液進行第二次稀釋。精液經過兩次稀釋后,含甘油的稀釋液對精液起作用需要一定時間,使甘油滲透到精子體內,達到滲透活性物質平衡,使精子具有抗凍能力。處理方法是把精液放進5℃冰箱內平衡2~5小時。
(二)冷凍精液的方法 根據不同冷源和分裝方式,凍結方法有下列兩類: 1.干冰埋藏法 顆粒滴凍:是用干冰為冷源制作顆粒凍精的方法。在盛滿干冰的容器中,用模板在干冰表面上壓孔,孔徑為0.5厘米,深2~3厘米。用滴管把平衡好的精液按0.1或0.2毫升的量滴入干冰孔窩內,再用干冰封埋2~4分鐘后移液氮或干冰內貯存。 2.液氮熏蒸法 (1)顆粒滴凍 在裝液氮的容器上放一銅紗網,距液氮面1~3厘米預冷幾分鐘,把經平衡處理的精液按定量均勻地滴在紗網上過2~4分鐘,待凍精顆粒變白時再收集到貯精瓶內,移入液氯罐中保存。滴凍過程中,可用消毒鋁飯盒蓋替代銅紗網。 (2)細管、安瓿分裝 精液可采用顆粒滴凍的相同方法處理。
(三)解凍方法 細管、安瓿分裝的凍精,可以直接在35~40℃的溫水中解凍,只等細管或安瓿內的精液融化一半時,便可以從溫水中取出來以備使用。解凍顆粒精液有干濕兩種方法: 1.濕法解凍 是在滅菌試管內注入1毫升1.9%檸檬酸鈉解凍液,將試管在水浴中加熱至35~40℃,取出顆粒精液 投進試管內,搖動融化以備使用。 2.干法解凍 是直接將顆粒凍精置于滅菌試管內,然后在水浴中加熱至35~40℃解凍即可。冷凍精液解凍后立即進行鏡檢,活力達到0.3以上的就可以用于輸精。要提高凍精的受胎率,一般采用1:1的低倍稀釋,40℃干法快速解凍,1億左右有效精子數的大量輸精和一個情期二次重復輸精等方法。
三,超數排卵與胚胎移植
(一)超數排卵 促卵泡素(FSH)能促使卵泡發育,促黃體素(LH)能引起排卵,使用有這些功能的促性腺激素類似物處理繁殖母羊,使其在未經處理時每個情期中只排1~7個卵的基礎上增加排卵數量,這就是超數排卵技術,簡稱“超排”。超數排卵處理可使母羊在一個情期內排出20個卵,個別母羊可高達50個卵。促使母羊超排的*時間是在發情周期的第12~13天,在羊頸靜脈注射促卵泡素(FSH)200~300國際單位,靜脈注射促黃體素(LH)100~150國際單位,可獲得超排效果。還可以使用促卵泡素(FSH)的類似替代物孕馬血清(PMSG)和 促黃體素(LH)的類似替代物絨毛膜促性腺激素(HCG),同樣在母羊發情周期的第12~13天,根據體重大小皮下注射孕馬 血清(PMSG)600~1100國際單位,出現發情表現后再注射絨 毛膜促性腺激素(HCG)500~700國際單位。如果沒有孕馬血清的制成品,可采妊娠50~90天期間的孕馬全血注射,一般每毫升孕馬全血含有50~200國際單位,由此可以推算全血用量。超數排卵的目的在于輸精后能獲得較多的受精卵,將其移植即可“借腹懷胎”形成新的個體,因此超數排卵只是胚胎移植的環節之一。
(二)胚胎移植 1.胚胎移植的意義 從一頭母畜的輸卵管或子宮內取出早期的胚胎(受精卵)移植到另一頭母畜的輸卵管或子宮內,讓其“借腹懷胎”繼續生長發育的過程就是胚胎移植,簡稱“胚移”。提供胚胎的畜體稱為“供體”,接受胚胎的畜體稱為“受體”。結合超數排卵技術,胚移可以迅速繁殖優良品種的后代,擴大純種數量。胚移還可以擴大繁殖具有特種經濟價值的家畜,如卡拉庫爾羊羔皮經濟價值很高,為此可通過胚移讓其他種類的母羊懷胎生產卡拉庫爾羔羊。還可以利用胚移技術將受精卵移植到家兔生殖道內進行長距離運輸,然后再移植到母羊子宮內,這樣可以減少胚胎損失,降低運輸成本。2.胚胎移植的技術環節胚移的主要技術環節就是收集胚胎和移植胚胎。 (1)收集胚胎 配種后3~8天內對供體母羊施行外科手術,在腹中線適當部位切開腹壁取出輸卵管。從子宮角上端注射生理鹽水或若干等滲生理緩沖溶液(簡稱沖洗液),并將沖洗液擠入子宮~輸卵管連接部,為此在輸卵管傘部插入直徑2.5毫米的塑料管,用鑷子固定輸卵管,將沖洗液沿子宮至輸卵管倒擠出來,用表面皿收集液體和胚胎。 (2)移植胚胎 接納胚胎的受體母羊應和供體母羊一起做同期發情處理,使二者的發情時間相同或接近。移植胚胎的方法同樣是在受體腹中線適當部位切開腹壁,找到排卵一側的卵巢,如黃體發育良好,將胚胎注射到同側子宮角上端或 輸卵管壺腹內。目前,國外已可用非手術法進行胚移,只需在供體母羊腹部切一小口,利用內窺鏡從供體母羊體內收集受精卵,然后移植到受體子宮即可。
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